在当代肿瘤治愈鸿沟网赌游戏软件，肿瘤DNA甲基化符号物动作一种紧要的生物符号物，在癌症的早期会诊、治愈遴选及预后评估中上演着越来越环节的扮装。为了鼓励DNA甲基化符号物在肿瘤解决中的应用，提高临床医技东谈主员及科研东谈主员对其紧要性的意识，同期标准检测经由，确保检测断绝的准确性和可靠性，中国抗癌协会肿瘤符号专科委员会组织了一批鸿沟内的大师学者，基于最新的商榷效果和临床推行训戒，共同编写了本大师共鸣。本共鸣系统性地先容了DNA甲基化符号物的基本意见、检测本领、临床应用范围过甚在肿瘤筛查、扶直会诊、追随会诊、复发监测和预后评估中的作用。本大师共鸣旨在为临床大夫、商榷东谈主员及检测东谈主员提供一套对于DNA甲基化符号物检测过甚临床应用的指导性建议，以促进该鸿沟的圭臬化发展，最终完了个性化肿瘤诊疗战略的优化，为患者的早筛、早诊以及精确诊疗提供决策依据。根据关系鸿沟的商榷进展，本大师共鸣将实时进行校正，以雀跃临床应用的需要。

本大师共鸣已在国际推行指南注册平台上登记，编号为PREPARE-2024CN173。凭据网罗于PubMed、中国知网、万方和维普等数据库，以及国度药品监督解决局（NMPA）、好意思国食物药品解决局（FDA）、欧盟医疗器械数据库（EUDAMED）等官方公开信息（检索断绝2024年3月22日）。所中式的商榷包括国表里公开发表的系统性综述、立时对照试验、队伍商榷以及病例对照商榷等。通过对文件进行抽象分析并衔尾临床训戒初步详情了保举建议。本大师共鸣的循证医学凭据品级参考牛津循证医学中心（OCEBM）的凭据品级（表1）。初步保举建议经过大师投票，投票选项包括答允、省略情和不答允。根据大师投票断绝，保举品级分为强保举、保举和未达成共鸣三个级别，若投票答允率卓著90%视为强保举，70%~90%视为保举，不然为未达成共鸣。

DNA甲基化是一种DNA的共价修饰，具体是指DNA甲基改动酶（DNA methyltransferases，DNMTs）将甲基加到DNA CpG序列中胞嘧啶的5'碳位，形成5-甲基胞嘧啶的过程。成簇的CpG被称为CpG岛（CpG islands，CGIs），主要位于结构基因的启动子和第一外显子区域。DNA甲基化符号物是癌细胞中的DNA特地甲基化改变，这种特地甲基化连结于癌症发生和发展的全过程。与传统的肿瘤符号物比较，DNA甲基化符号物具有更早期、更无创、更精确等优点。因此，不错通过非侵入性表情取得的痰液、血浆、血清或尿液等样本进行DNA甲基化符号物检测。一些DNA甲基化特地发生在肿瘤形成的启动阶段，通过检测与肿瘤发展关系的甲基化符号物，不错扶直癌症早期会诊、评估进展风险。DNA甲基化符号物甲基化水平的增多或质问与肿瘤预后密切关系，可用于治愈或根治性手术后评估肿瘤微弱残留病灶（MRD）和监测复发。此外，DNA甲基化符号物还可动作化疗明锐性的符号，某些特定基因的甲基化可能预示着癌症对治愈的响应，可用于判断化疗药物的疗效，以更好地指导治愈决策。

2.1 临床样本前处理刺目事项

细胞基因组与游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）均可用于肿瘤DNA甲基化检测，常继承组织、血液样本，也可继承尿液、浆膜腔积液、灌洗液、粪便、拭子等样本。针对不不异本类型还应刺目以下事项：⑴组织样本。组织样本离体后应在低温、水合情景下保存和转运。如不行立即开展后续处理，可遴选将组织置于-70 ℃及以下环境，以永远保存；或者制成石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded，FFPE），可于室温保存3~5年。⑵血液样本。采集血浆标本，抗凝剂选用EDTA或枸橼酸，不可使用肝素。检测cfDNA时建议足量采集2×10 mL全血。溶血、脂血和黄疸标本建议再行采集。样本输送过程中应幸免机械应力致血细胞闹翻，气动管谈输送可能增多细胞基因组DNA开释。现时，临床肿瘤DNA甲基化分析常检测的血液组分包括外周血单个核细胞（peripheral blood monocyte，PBMC） 、轮回游离DNA（circulating cell-free DNA，ccfDNA）、轮回肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA），但不同组分的生物学特色存在各异（表2）。继承普通抗凝采血管时，采集后至分离不宜超出4~6 h，因为后续白细胞踏实性会着落；如要求表率、延伸分离不可幸免，则在4 ℃下保存不超出24 h。继承添加防腐剂的采血管时，建议在3 d内进行分离。改动无细胞血浆时应严格幸免混入细胞及细胞碎屑，并改动至低DNA吸附管中保存。分离待测组分前不可冷冻保存含有红细胞的全血样本，以免严重溶血。经分离后待测组分可在-70 ℃及以下永远保存，刺目幸免反复冻融，而且解冻过程需置于冰上徐徐进行。⑶清新体液及灌洗液样本。如样本含较多血液要素，可进行抗凝处理，幸免室温下永劫候甩掉。可通过高速离心及超滤本领富集分离细胞或cfDNA。经分离后，待测组分的处理同血液样本。⑷粪便样本。粪便样本含大齐微生物，采集保存过程应解雇所用试剂耗材说明并尽快送检，质问DNA抽提前非冷冻保存及输送时候。保举使用含防腐剂保存液，以减少东谈主源性DNA降解。⑸拭子样本。应使用专用采集器，采样后可置于保存液或风干保存。风干拭子室温下保存不卓著3 d，后续操作前需加入缓冲液重悬；在保存液中，拭子样本在2~8 ℃下保存不卓著7 d，-20 ℃下保存不卓著30 d。

千般样本经采集后，应尽可能减少转运环节与耗时，赶早分离检测组分。血液样本应幸免溶血，不可使用肝素抗凝。检测游离DNA时，采集量应饱和，赶早继承两步离心法分离无细胞血浆，分离前不可对含红细胞血样进行冻存。清新体液及灌洗液样本如含较多血液要素可进行抗凝处理。粪便样本保举继承含防腐剂保存液。（保举品级：强保举）

2.2 DNA甲基化符号物检测本领方法

2.2.1 DNA索求与纯化 宜根据样本类型、检测目的遴选DNA索求纯化方法，临床常继承离心柱法和磁珠法。索求纯化应在故意区域内进行，cfDNA与细胞、组织样本应分区处理，以幸免基因组混浊。保举使用自动化索求开拓，以减少批次间各异。索求后宜尽快检测，永远保存应幸免反复冻融（建议≤3次）。针对不同检材，抽提前还应刺目以下操职业项：⑴组织检材。取材应中式细胞密集区域，幸免出血、坏死、自溶部分。肿瘤细胞比例含量<20%时建议富集。清新组织块应经液氮冷冻后研磨或使用开拓破灭匀浆。FFPE样本切片厚度以8~10 μm为宜，脱蜡后予酶消化去除卵白、脂质等物资，消化酶处理要求较清新组织浓度高（>20 g／L）、时候长（3~5 h）。⑵细胞检材。粪便、体液、灌洗液、缓冲液拭子等样本可用于富集零碎细胞，其中粪便样本应以缓冲液或裂解液充分回荡、裂解，离心去除不可溶性千里淀物后再操作。⑶cfDNA检材。抽提过程中选用特定磁珠居品可保留较竣工DNA、富集较短DNA片断，高效分离核酸故意于卑劣甲基化检测。cfDNA经索求纯化后应评估片断散播，以摒除基因组DNA混浊。

2.2.2 DNA转动 现时DNA转动的主流本领包括基于化学试剂的重亚硫酸盐转动和基于酶法的虚心转动，而甲基化明锐的表率性内切酶本领（methylation sensitive restriction endonuclease PCR，MSRE-PCR）无需转动处理。

基于化学试剂的重亚硫酸盐转动本领通过重亚硫酸盐处理DNA，将DNA中未甲基化的胞嘧啶（C）转动为尿嘧啶（U），经过PCR扩增后进一步变成胸腺嘧啶（T）而正本甲基化的C保抓不变，通过测序后对DNA序列的分析分离甲基化情景的不同。重亚硫酸盐转动时候短，速率快，转动效率高，但转动过程中剧烈的温度和pH变化会导致DNA降解和断裂，因此此类转动本领更适用于肇端相较高的样本。

基于酶法的虚心转动本领运用易位双加氧酶2（ten-eleventranslocation methylcytosine dioxygenase 2，TET2）和T4-噬菌体-β-葡糖基改动酶（thermo scientific T4 -glucosyltransferase，T4-BGT）进行，该本领相对虚心，幸免了DNA降解和断裂，但试剂储运要求要求高，操作繁琐，响适时候长，转动效率不如化学法踏实，现时还有待进一步的临床考证。基于易位双加氧酶氧化和硼烷类化合物还原的新式酶法转动本领能将甲基化的C转动为二氢尿嘧啶（dihydro uracil，DHU），通过PCR扩增转动为T，但此类本领转动效率和踏实性尚需进一步优化。

MSRE-PCR本领基于甲基化明锐的表率性内切酶无法切割位点中甲基化修饰序列的道理，无需对序列进行转动。因此，MSRE-PCR需要的肇端样本要求低，比对效率高，是将来DNA甲基化检测应用具有发展后劲的主张。MSRE-PCR本领操作毛糙，DNA耗费少，然而酶切效率需要进一步优化，以保证检测的准确性。

2.2.3 DNA甲基化检测平台 现时临床最常用的DNA甲基化检测平台为实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR），下一代测序（next generation sequencing，NGS）和核酸质谱也有一定应用。qPCR平台可同期检测一个或数个DNA甲基化符号物，因操作毛糙而在临床中闲居应用。qPCR平台对DNA进行转动处理后，用引物和特异性探针对所测核苷酸位点进行检测，具有浅易、高效、快速、可重迭等上风。数字PCR（digital PCR，dPCR）是新兴的第三代PCR检测本领，通过将每个核酸分子分派到一个孤独的空间内，对多个孤独单位中的响应体系进行相互孤独的扩增，并读取其响应后的荧光强度，以界定阴性和阳性过甚比例。dPCR具有实足定量、灵敏度高、分辨率好等特色。

NGS不错同期进行数百个至全基因组的DNA甲基化检测，检测通量高，但本领和操作复杂。DNA甲基化检测的文库构建战略分为“先建库后转动”和“先转动后建库”两种。cfDNA检测主要包括5个设施：DNA索求、文库构建、测序、生信分析和讨教解读。NGS平台应衔尾客不雅要求和诊治需要遴选不同的基因panel，用于癌症早筛的NGS检测需要进行前瞻性临床试验。现时尚无获批临床使用的基于NGS平台的DNA甲基化检测居品，部分居品在注册评审过程中或以实验室自建检测方法（laboratory developed test，LDT）阵势进行检测办事，适用于单癌种、多癌种或泛癌的检测。

核酸质谱平台基于基质扶直激光解吸电离翱游时候（MALDI-TOF）本领，可同期检测数个至数十个DNA甲基化符号物，可完了中通量级别的踏实检测，不错取得最大500 bp范围之内一谈连气儿的CpG位点的甲基化定量水平。部分检测机构提供LDT检测办事，适用于单个或多个肿瘤的检测。检测时需刺目幸免响应体系中的Na+、K+等盐离子残留导致核酸峰的位置漂移，样本和基质的结晶要充分，仪器的质料校准要按时校对，校准准确度在400 ppm及以下，分辨率在400及以上。

抽提纯化所得DNA应根据样本类型制定质料及格圭臬并进行评价，包括浓度、纯度和DNA竣工性。cfDNA还应评估片断散播，以摒除基因组DNA混浊。DNA甲基化检测需要针对不同的标本类型与检测应用遴选符合的转动方法，并关怀转动本领的最新进展。qPCR具有高效、赶快、操作浅易等上风；基于NGS平台的DNA甲基化检测通量高，但操作复杂且本钱较高；核酸质谱平台是一个在通量、价钱、时候等方面均介于PCR和NGS本领之间的平台。DNA甲基化检测平台的遴选需要针对符号物数目、临床应用场景及检测要求进行抽象评估。（保举品级：强保举）

3.1 DNA甲基化符号物在单癌种筛查中的应用

运用外周血进行cfDNA甲基化检测是连年来针对肿瘤早期进行无创会诊的紧要表情。2008年已有商榷阐明结肠癌组织SEPTIN9基因启动子存在不同进度甲基化，并忽视外周血SEPTIN9 甲基化可用于结直肠癌（colorectal cancer ，CRC）早期筛查 。2024年，《新英格兰医学杂志》连发两篇对于CRC无创筛查的商榷效果，其中一款基于血液 cfDNA 基因组变异、DNA甲基化情景和碎屑组模式的CRC早期筛查器具Shield，在ECLIPSE商榷中会诊CRC的明锐性为 83.1%（95%CI：72.2%~90.3%），特异性为 89.6%（95%CI：88.8%~90.3%）。通过检测LASS4、LRRC4、 PPP2R5C和ZDHHC1基因甲基化筛查,CRC的BLUE-C商榷长远，其检测明锐性为 93.9%（95%CI：87.1%~97.7%）；检出晚期癌前病变的明锐性为 43.4%（95%CI：41.3%~45.6%），对非肿瘤性发现或阴性结肠镜查抄的特异性为 92.7%（95%CI：92.2%~93.1%）。国内一项纳入1 381例患者的多中心前瞻性商榷阐明RNF180和SEPTIN9基因甲基化是理思的胃腺癌符号物，对早期胃癌（Ⅰ期、Ⅱ期）的检测灵敏度远高于CEA、CA199、CA125等传统的卵白肿瘤符号物。《中国早期胃癌筛查检修本领大师共鸣》初次忽视，RNF180/Septin9基因甲基化检测可用于早期胃癌筛查，和谐检测RNF180、Septin9基因甲基化和肿瘤符号物可进一步栽培胃癌筛查的灵敏度。通过在肺泡灌洗液中和谐SHOX2和RASSF1A甲基化检测对肺癌的总体会诊断绝均优于单纯的细胞学查抄，对肺癌的早筛早诊具有积极的临床道理。继承外周静脉血进行靶向DNA甲基化测序，构建PulmoSeek模子用于扶直临床大夫开拓肺结节良恶性会诊模子，有助于提高早期肺癌的会诊。国内商榷团队通过cfDNA的 DNA甲基化水平构建早期肝癌会诊预测模子，断绝发现基于 cfDNA甲基化的预测模子对早期肝癌的灵敏度和特异度均优于传统血清符号物。

DNA甲基化本领也不错应用于宫颈癌筛查的高危分流，能对东谈主乳头瘤病毒（HPV）阳性患者进行初步分流。上海交通大学从属国际和平妇幼保健院团队开拓了纳入3 251例hrHPV阳性女性的前瞻性商榷队伍，对HPV查抄的剩余样本进行PCDHGB7基因甲基化检测，与细胞学检测比较，PCDHGB7甲基化检测减少了62.2%的非16/18型高危hrHPV阳性女性的转诊，显线路更为优厚的特异度（92.1% vs 74.9%）。

DNA甲基化本领为肿瘤早筛提供了一种高效、非侵入性且具有闲居应用后劲的筛查方法，完了了对结直肠癌、胃癌、肺癌、肝癌和宫颈癌的早诊早筛。（凭据品级：2级；大师保举品级：保举）

3.2 DNA甲基化符号物在多癌种筛查中的应用

跟着癌症筛查本领的持续跳跃，临床上主要有两种多癌种筛查战略，第一种所以全癌符号物为代表的单一符号物的全癌种筛查，第二种是衔尾了组织溯源本领的多个肿瘤符号物组合筛查战略。

3.2.1 基于全癌符号物战略的多癌种筛查应用 应用导航定位测序（guide positioning sequencing，GPS）本领，通过对全基因组DNA高精度和高掩饰度的甲基化位点进行筛查，于文强团队挖掘了基于DNA甲基化位点的全癌符号物，这类DNA甲基化符号物可用于多种癌症的筛查，其中通过全基因组DNA甲基化数据挖掘的HIST1H4F基因在17种癌症中呈特地高甲基化。该团队筛选的全癌符号物PCDHGB7在不仅在TCGA数据库的17种癌症类型中齐呈高甲基化，后续还在13种临床肿瘤样本中得到考证。SIX6基因在10种常见癌症类型的 678 份临床样本推崇出宽绰的高甲基化，其中，SIX6基因高甲基化会诊宫颈癌、子宫内膜癌及尿路上皮癌的ROC弧线底下积（area under the curve，AUC）分别为0.99、0.94及0.93，标明SIX6高甲基化是肿瘤进展的早期事件，不错应用于肿瘤的临床早期筛查。

3.2.2 基于cfDNA的DNA甲基化符号物在多癌种筛查中的应用 基于cfDNA的DNA甲基化符号物由于其非侵入性本性已成为癌症早期会诊有长进的生物符号物。一项针对cfDNA测序本领在肿瘤早筛中应用的商榷长远，cfDNA甲基化是预测癌症信号开头的最好符号物，甲基化分类器具有最高的肿瘤检测灵敏度。在多癌种早检商榷THUNDER中，对血液中的cfDNA进行靶向甲基化检测，检测结直肠癌、食管癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌等6种肿瘤的明锐性为69.1%，特异性为98.9%。

跟着本领的发展，cfDNA甲基化与其他组学信息的整合极地面提高了肿瘤早期筛查的准确性。Van Thien Chi Nguyen商榷团队应用cfDNA甲基化组学和片断组学信息，在乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌和肺癌等5类肿瘤中进行会诊考证，明锐性为72.4%、特异性为97.0%。清华大学商榷团队通过cfDNA甲基化特征构建SRFD-Bayes会诊模子，在乳腺癌、结肠腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、肝细胞癌和前方腺癌等肿瘤中进行考证，该模子对肿瘤定位的平均准确率为76.9%，肿瘤早期检测的明锐性为86.1%，特异性为94.7%。

通过检测一种或几种在多种癌症中宽绰存在的DNA甲基化符号物概况快速地对多种癌症进行初步筛查。这种方法适用于大限度的东谈主群筛查，尤其是在资源有限的情况下，不错动作一种经济、有用的筛查技巧。此外，衔尾了组织溯源本领的多个肿瘤符号物组合筛查战略，提供了更为精确的筛查断绝，但这种战略的本领要求及本钱更高。在遴选顺应的癌症筛查战略时，医疗专科东谈主员需要抽象斟酌筛查的目的、主张东谈主群的特色、可用的医疗资源以及患者的具体情况。（凭据级别：2级；大师保举品级：强保举）

3.3 DNA甲基化符号物在肿瘤筛查中的上风

DNA甲基化符号物在肿瘤筛查中有几大上风：⑴具备肿瘤特异性。在不同的肿瘤阶段，DNA甲基化位置和甲基化水平存在各异，而特地的DNA甲基化是肿瘤的特征之一。⑵发生在肿瘤早期致使癌前病变阶段。这些DNA甲基化的表不雅遗传变化大部分发生在肿瘤的早期，并抓续存在于肿瘤发展全程，且在一谈肿瘤类型中宽绰存在。⑶不错液体活检。肿瘤组织中的DNA甲基化片断不错开释到血液和体液中，以ctDNA的阵势存在，并可在血液中被踏实地检测。⑷不受烦躁。克隆造血导致的突变对检测血液中ctDNA的突变形成很大的影响，而检测ctDNA的甲基化不受影响。因此，在基于血液ctDNA的液体活检中，检测ctDNA甲基化比检测ctDNA突变更准确。

4.1 DNA甲基化符号物用于组织病理学检测

病领悟诊（包括细胞和组织病理学查抄）可能会受标本体量和病理学家会诊水平的影响，新兴的分子会诊方法如DNA甲基化检测具有精深的组织特异性，愈加明锐和客不雅，不错克服形态学会诊的固有劣势。

4.1.1 DNA甲基化用于扶直病领悟诊 国内肺癌商榷数据长远，在病领悟诊藕连丝断的时候，穿刺活检FFPE样本的SHOX2和RASSF1A甲基化检测的特异性为90.4%，明锐性为89.8%。甲状腺癌亦然我国高发癌种，甲状腺穿刺的形态病领悟诊亦然责任难点，运用甲基化芯片不错有用分离甲状腺良恶性病变，明锐性为94.3%，特异性为82.4% 。TIMP3、RARB2、SERPINB5、RASSF1、TPO和TSHR等6种基因甲基化组合在分离甲状腺乳头状癌和正常甲状腺组织时推崇出91%的明锐性和81%的特异性。乳腺穿刺样本不错通过10个甲基化目的的检测组合进行良恶性分离，AUC值达0.960。前方腺穿刺不错使用PITX2甲基化扶直会诊。穿刺病理和谐甲基化检测动作扶直会诊不错进一步栽培会诊效力，减少漏诊。

4.1.2 DNA甲基化用于病理亚分型 不同病理亚分型与患者的治愈决策及预后密切关系，DNA甲基化符号物用于分子分型，也不错动作评估肿瘤侵袭性的表情之一。脑胶质瘤是临床上常见的一类颅脑肿瘤，其组成比在脑肿瘤中高达60%。《2020版好意思国国立抽象癌症相聚脑胶质瘤临床推行指南》指出MGMT基因启动子甲基化是统统高档别脑胶质瘤（Ⅲ级和Ⅳ级）分子会诊的紧要部分，其启动子甲基化是脑胶质瘤患者预后的孤独预测因子。2019年，NMPA批准石蜡组织切片MGMT基因甲基化会诊试剂盒应用于临床。国际商榷团队创建了一个核心神经系统肿瘤分类器，该分类器中76%的病理形态学和甲基化分级一致，12%的病例根据甲基化图谱取得了校正会诊。

肿瘤DNA甲基化检测不错在病领悟诊艰巨的标本中扶直提高会诊准确性（凭据级别：3级，保举品级：强保举）。肿瘤DNA甲基化符号物能进行更精确的分子分型，指导治愈和预后评估，如MGMT启动子甲基化检测（凭据级别：1级；保举品级：强保举）。甲基化分类器模子应用在核心神经系统肿瘤分子分型中将进一步提高其病领悟诊的准确性。

4.2 DNA甲基化符号物用于零碎细胞学检测

现时时见的含有肿瘤零碎细胞的标本类型主要有脑脊液、胸腔积液、腹腔积液、尿液、肺泡灌洗液等体液，以及粪便、宫腔名义刷取物、痰液等。

4.2.1 零碎细胞甲基化符号物用于女性生殖谈肿瘤的临床会诊 女性生殖谈内腔的清醒性让刷取宫颈零碎细胞进行无创分子检测子宫颈癌、子宫内膜癌成为可能。上海交通大学从属国际和平妇幼保健院团队对宫颈零碎细胞学查抄的剩余样本进行PCDHGB7基因甲基化检测，PCDHGB7检测≥宫颈高档别鳞状上皮内瘤变的明锐性和特异性分别为82.1%和88.7%，检测宫颈癌的AUC为0.97。两项中国大型临床商榷分别使用PCDHGB7甲基化和PAX1甲基化进行高危型HPV阳性女性的分层解决，会诊的明锐性分别为82.4%和76.9%，特异性分别为91.1%和91.6 %。国表里商榷与大师建议，保举子宫颈癌DNA甲基化筛检临床旅途（图1）：⑴HPV阳性高风险或细胞学特地女性的分层解决；⑵ 宫颈Ⅲ型转动区与潜在腺癌病东谈主风险评估；⑶病变（癌）治愈后监测；（4）退出宫颈癌筛查蓄意的评估。

40%~50%的子宫内膜癌患者的宫颈零碎细胞可检测到子宫内膜癌细胞，这让使用零碎细胞进行内膜癌甲基化早期会诊具临床可行性。通过宫颈口零碎细胞检测子宫内膜癌，PCDHGB7甲基化对早期（Ⅰ期）子宫内膜癌会诊的明锐性为85.71%，特异性为80.60%，现时基于该基因的检测居品已取得欧盟CE认证。CDO1和CELF4甲基化检测的明锐性和特异性分别为87.5%和90.8%，BHLHE22/CDO1/HAND2的明锐性和特异性分别为87.0%和86.0% 。卫生棉条网罗阴谈样本与医师采样可达到一致的DNA甲基化检测水平。国表里商榷与大师建议，保举子宫内膜癌DNA甲基化筛检临床旅途：⑴影像学和谐甲基化筛检；⑵生殖谈出血分层解决；⑶子宫内膜癌高风险东谈主群筛查。

4.2.2 零碎细胞甲基化符号物用于膀胱癌的扶直会诊 国内现时针对东谈主尿液零碎细胞检测试剂盒有2款被NMPA批准，分别是东谈主类TWIST1基因甲基化检测试剂盒和东谈主类ONECUT2/VIM基因甲基化检测试剂盒，检测明锐性分别为88.2%和91.2%；特异性分别为86.8%和85.7 %。一些基于尿液零碎细胞DNA甲基化检测早期膀胱癌的居品被FDA/CE批准上市，如AssureMDx（MDx Health，Irvine，CA，USA）及TAGMe（Epiprobe，Shanghai，China）。AssureMDx检测膀胱癌明锐性为93%，特异性为86%，TAGMe检测尿液中SIX6甲基化的情景，其会诊尿路上皮癌的明锐性为86.67%，特异性为90.80%，该居品已获欧盟CE认证，并于2023年取得FDA的“冲破性医疗器械认定”。

4.2.3 零碎细胞甲基化符号物用于结直肠癌的临床会诊 2014年，FDA 批准民众第一款基于粪便零碎细胞DNA检测的肠癌早筛试剂盒Cologuard，用于结直肠癌高危风险东谈主群筛查。其包含有免疫法粪便潜血试验、KRAS突变检测、NDRG4和BMP3基因的甲基化检测。国内多款粪便零碎细胞甲基化检测试剂盒亦然基于这些目的进一步改善和提高试剂盒的会诊效率。针对国产试剂盒的商榷数据标明，粪便基因甲基化检测对Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌的会诊明锐性可达95.45％，特异性为81.6％，顺应用于其扶直会诊。粪便基因甲基化检测存在的问题包括患者的允从性差、样本现场获取艰巨、异质性高以及粪便样本检测科室剿袭度差等。居家采样衔尾实验室检测的模式可能更顺应粪便样本检测。

4.2.4 零碎细胞甲基化符号物用于肺癌的扶直会诊 国内关系商榷长远，肺泡灌洗液中和谐SHOX2和RASSF1A甲基化检测对肺癌的总体会诊明锐性和特异性分别为72.8%和87.1%，明锐性显赫高于细胞学查抄。该试剂盒已被NMPA批准用于肺癌高风险东谈主群扶直会诊。通过检测肺泡灌洗液样本中的HIST1H4F甲基化水平会诊肺癌，其特异性为96.7%，明锐性为87.0%，其中针对Ⅰ~Ⅱ期肺癌的明锐性为82.6%~84.5%。有团队构建基于胸水零碎细胞的PCDHGB7甲基化会诊模子，判断肺癌是否出现胸膜改动的明锐性为94.21%。

零碎细胞DNA 甲基化检测是一种新式的、浅易的、无创的扶直癌症早筛早诊器具。零碎细胞甲基化检测扶直宫颈癌、膀胱癌、结直肠癌及肺癌会诊已获NMPA批准，具备临床可行性，但仍需要在国内更多临床数据考证下完善DNA甲基化符号物使用的临床旅途（凭据品级：2级；大师保举品级：强保举）。

4.3 DNA甲基化符号物用于血液检测

血液中的DNA甲基化符号物不错在癌症发生早期被检测到，且追随癌症发展和治愈过程。国表里如故有大齐的商榷在不同癌种中对血液检测DNA甲基化符号物进行探索，以期概况扶直癌症会诊。

4.3.1 结直肠癌 商榷长远外周血中甲基化SEPTIN9有助于扶直会诊结直肠癌，明锐性为80.0%，特异性为95.3%，和谐免疫法粪便潜血试验（FIT）可进一步提高结直肠腺瘤的检出率。此外，结直肠癌患者血浆样本中Septin9、SDC2及BCAT1三种基因启动子区域呈高甲基化水平，Septin9和谐SDC2、BCAT1具有较好的扶直会诊价值，明锐性为82.7%，特异性为96.9%，进一步和谐FIT和CEA，其AUC为0.962。上述基因检测试剂盒已被NMPA批准用于疑似结直肠癌患者的扶直会诊。

4.3.2 胃癌 SEPTIN9与RNF180基因甲基化在胃癌患者血浆样本中显赫升高，胃癌检测的明锐性为61.76%，特异性为85.07%。该基因谱检测试剂盒已被NMPA批准用于胃癌眷属史或40岁以上胃癌高风险东谈主群的检测。RNF180、SEPTIN9基因甲基化和谐其他肿瘤符号物可进一步栽培胃癌会诊明锐性，一项前瞻性队伍商榷断绝长远RNF180、SEPTIN9和谐CA72-4检测的总明锐性为68.6%。

4.3.3 肺癌 肺癌患者血浆中SHOX2甲基化水平显赫升高，会诊明锐性为60%，特异性为90%，相较于肺腺癌，其会诊小细胞肺癌 （80%）和鳞状细胞癌（63%）具有更高的明锐性。SHOX2、RASSF1A及PTGER4等3种基因和谐检测推崇出精深的分离恶性和良性肺病的性能，明锐性为 87.0%，特异性为 98.0%，上述基因谱检测试剂盒已被NMPA批准用于疑似肺癌患者的扶直会诊。

4.3.4 肝癌 国内一项临床商榷通过检测肝癌患者血浆ctDNA中的BMPR1、PLAC8、ATXN1及KLF3等10个基因的甲基化水平，会诊肝癌的明锐性为83.3%，特异性为90.5%。现时BMPR1和PLAC8基因甲基化试剂盒已被NMPA批准用于疑似肝癌患者的扶直会诊。还有商榷发当今肝细胞癌患者ctDNA中存在大齐孤独的高甲基化基因位点，如DBX2、THY1、TGR5、MT1M、MT1G、INK4A、VIM、FBLN1、RGS10、ST8SIA6和RUNX。

4.3.5 妇科生殖谈肿瘤 比较于当今闲居使用的CA125，cfDNA甲基化符号物的上风在于从平均风险东谈主群中识别出早期卵巢癌患者。一项商榷使用APC、RASSF1A、CHDH1、RUNX3、TFP12、SRP5和OPCML等7种基因的组合甲基化检测卵巢癌，该组合检测卵巢癌的特异性为90.57%，其中检测早期卵巢癌的明锐性为85.37%，而CA125的明锐性仅为56.10%，特异性为64.15%。

血液DNA甲基化符号物检测扶直癌症会诊的凭据越来越多，尤其是DNA甲基化符号物在结直肠癌、胃癌、肺癌、肝癌的扶直会诊PCR试剂盒如故在国内获批，然而还需要针对现存的居品持续进行本领优化，确保DNA甲基化检测的可重迭性和踏实性（凭据品级：2级；大师保举品级：强保举）。DNA甲基化检测在卵巢癌中不异具有较好的应用长进，但尚未老到（凭据品级：3级；大师保举品级：强保举）。

4.4 DNA甲基化符号物应用于肿瘤溯源

原发灶不解恶性肿瘤（carcinoma of unknown primary，CUP）是一类经病理学会诊为改动性恶性病灶，然而经过老例查抄和评估仍不行详情原发部位的异质性肿瘤，占一谈肿瘤病例的3%~5%。越来越多的商榷凭据标明通过对肿瘤甲基化情景的检测，不错完了对肿瘤原发部位的溯源。FERNANDEZ等通过对1 628例肿瘤患者组织标本的甲基化图谱分析，签订并识别出 24 种肿瘤特异性的甲基化改变模式，能用于CUP的肿瘤类型溯源。MORAN等构建的基于组织DNA甲基化谱的肿瘤类型分类器（EPICUP）在7 691个肿瘤的考证聚会显线路99.6%的特异性和97.7%的明锐性，DNA甲基化谱预测了216例CUP患者中的188例（87%）的原发开头。ZHU等运用组织特异性单细胞RNA测序数据集构建了一个界说为13种实体组织类型和40种细胞类型的DNA甲基化图谱，断绝长远该图谱概况正确地预测不同肿瘤类型的发源细胞。

cfDNA甲基化已被施展是相配有长进的特征性符号物，不仅能检测癌症，还能定位其组织开头。一项针对cfDNA的测序分析本领在肿瘤早筛中的临床商榷，准确预测了75%（95/127）肿瘤样本的组织信号开头。还有商榷开发了组织特异性DNA甲基化符号物，其中肝源性DNA实足浓度为能更好地分离结直肠癌肝改动患者和无肝改动患者。STACKPOLE等开发了基于cfDNA的肿瘤溯源方法并应用于408例结肠癌、肝癌、肺癌和胃癌患者及对照组，在97.9%的特异性下，检测全期和早期癌症的明锐性分别为 80.7% 和 74.5%，溯源全期和早期癌症的准确率分别为89.1% 和 85.0%。

肿瘤溯源是肿瘤临床诊疗的紧要责任，可为肿瘤精确治愈提供依据。有别于传统溯源方法，基于组织标本或cfDNA的DNA甲基化检测在肿瘤溯源鸿沟展示出精深的应用长进，但现时尚无获批检测试剂用于临床，后续仍需累积充分的临床考证数据，以开拓健全的数据库和优化检测算法，进一步提高溯源本领的灵敏性和特异性（凭据品级：3级；大师保举品级：强保举）。具体临床推行中仍需衔尾组织病理进行肿瘤溯源。

5.1 DNA甲基化符号物扶直药物的遴选

MGMT启动子区域甲基化水平可用于评估脑胶质瘤对替莫唑胺的明锐性，启动子甲基化阳性的患者对替莫唑胺的明锐性高于甲基化阴性的患者。RASSF10基因甲基化可能是肝癌对多西他赛耐药的符号；QPCT启动子区域的甲基化进度及QPCT 的抒发水平不错动作预测肾癌对舒尼替尼明锐性的生物学符号物；p16甲基化是预测胃癌对阿贝西利（Abemaciclib）明锐性的潜在符号物；TROP2 甲基化可预测乳腺癌对他莫昔芬耐药；ERCC1和MGMT基因甲基化可动作结直肠癌患者对 FOLFOX 响应的预测符号物；HSP70甲基化通过与BCL2 mRNA 衔尾使其踏实，导致胰腺癌细胞对治愈产生耐药。

5.2 游离DNA甲基化符号物监测药物响应

跟着生物信息学的跳跃和cfDNA甲基化检测本领的持续老到，现时如故开拓了癌症特异性甲基化模式，使通过检测cfDNA甲基化（血液或其他体液）进举止态监测药物响应成为可能在剿袭新扶直化疗和/或手术的非小细胞肺癌中，RASSF1A和RARβ2甲基化会着落到健康受试者水平，辅导动态检测DNA甲基化水平不错监测其治愈响应。在剿袭顺铂化疗的肺癌患者中，24 h内APC和/或RASSF1A甲基化水平增多与总生涯期（overall survival，OS）增多关系。临床不雅察发现，对化疗和（或）放疗有响应的晚期肺癌患者在入手治愈后7~10 d内血浆中SHOX2甲基化水平着落，且治愈前和治愈后7~10d的高SHOX2甲基化水平与较短的OS关系。在妇科肿瘤中，通过检测cfDNA中MLH1的甲基化水平可预测卵巢癌患者对铂类药物的明锐性；通过检测HOXA9和RAD51C基因的甲基化水平可预测PARPi的治愈效果；而检测KANSL1甲基化水平可预测卵巢癌的免疫治愈疗效。

MGMT基因甲基化水平与脑胶质瘤药物替莫唑胺的明锐性密切关系，该基因的甲基化检测如故老到应用于临床（凭据品级：1级；大师保举品级：强保举）。一些基因的DNA甲基化水平与肝癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌及胰腺癌的药物明锐性议论，但仍需更多临床试验进一步考证（凭据品级：3级；大师保举品级：强保举）。通过检测cfDNA的甲基化水平，不错动态监测肺癌和卵巢癌患者对治愈决策的响应，但不同癌种的治愈表情存在各异，且DNA甲基化评分圭臬也不同，在临床应用前需要开拓相应质控圭臬（凭据品级：2级；大师保举品级：强保举）。

6.1 DNA甲基化符号物用于评估肿瘤的微弱残余病灶

经手术或治愈后的MRD是肿瘤复发的主要原因。DNA甲基化符号物用于MRD分析时不需要取得原发肿瘤特征性的突变信息，其灵敏度不依赖于患者高频突变数目，对MRD检测具有很大的后劲。现时，已有凭据阐明DNA甲基化符号物可应用于MRD检测，以此识别术后高复发风险东谈主群，以筛选扶直治愈获益东谈主群，幸免复发低风险患者承受过度的治愈。

基于LUNAR-1商榷断绝，运用ctDNA突变和谐ctDNA甲基化对结直肠癌患者进行MRD检测及复发监测，与单独ctDNA突变比较，整合ctDNA甲基化分析的明锐性提高25%~36%。一项前瞻性Ⅱ~Ⅲ期临床试验（注册号：NCT00958737）纳入805例结直肠癌患者分析了手术前后血浆样本中ctDNA甲基化符号物（WIF1和NPY）评估MRD与肿瘤复发的关系，发现ctDNA阴性组2年无病生涯率彰着高于ctDNA阳性组（82% vs 64%）。另一项Ⅱ~Ⅲ期归来性商榷纳入87例乳腺癌患者，经新扶直化疗后，患者血浆中ctDNA基于RASSF1A启动子的超甲基化（met-ctDNA）水平与残余肿瘤负荷进度显赫关系（P=0.008）；同期，术后1年met-ctDNA阳性患者中（7例）有3例出现肿瘤复发，而met-ctDNA阴性患者均未出现。

基于ctDNA甲基化符号物的MRD分析不需要对肿瘤组织进行测序以取得原发肿瘤的特征性突变信息，何况不受克隆造血导致的突变烦躁，可用于结直肠癌和乳腺癌患者术后或其他治愈完全缓解后的MRD检测，有望成为肿瘤患者预后风险解决的环节器具（凭据品级：2级；大师保举品级：强保举）。DNA甲基化符号物在MRD分析上的应用后劲远未完全挖掘，仍需大齐的临床数据来相沿其膨胀至更多癌种，并对现存的本领经由和内容进行深入优化，以进一步提高其临床应用价值。

6.2 DNA甲基化符号物用于肿瘤复发监测

cfDNA较短的半衰期使其与肿瘤细胞演进情景密切关系，也使其用于肿瘤复发的动态监测成为可能。在一项肝癌的大队伍临床数据商榷中，通过整合全基因组甲基化水平、临床大数据分析和机器学习，开拓了含有8个甲基化符号物的肝癌预后预测模子，生涯弧线长远高风险组生涯率均彰着低于低风险组，且该预测模子对预后的评估智商优于临床分级。近似地，基于ctDNA甲基化符号物的机器学习算法用于CRC患者的预后判断商榷发现，治愈后肿瘤残留患者及复发患者的评分较高，此外预后预测模子还能有用预测CRC患者的预后和生涯期。还有一项针对Ⅰ~Ⅲ期CRC的多中心、前瞻性队伍商榷纳入了299例患者，分析手术前、手术后、扶直化疗时及化疗收尾后血浆中6种ctDNA甲基化符号物水平，断绝发现术后1个月ctDNA甲基化阳性患者的复发风险是阴性患者的17.5倍，而且该甲基化检测辅导复发改动早于影像学凭据，中位期提前3.3个月。在CRC中，cfDNA甲基化符号物衔尾血清CEA构建评分体系可在临床或影像学发现复发灶之前预测复发，提前的中位天数为106 d（范围：90~232 d）。在前方腺癌患者中，多西他赛治愈两个周期后检测不到血清GSTP1甲基化的患者生涯时候更长，辅导血清游离 GSTP1 甲基化可能是一种有后劲的临床试验替代绝顶和临床决策器具。

DNA甲基化符号物可用于评估肝癌、结直肠癌及前方腺癌等肿瘤进展及复发的动态监测，优化患者风险分层及治愈措施（凭据品级：2级；大师保举品级：强保举）。常回复发监测符号物与DNA甲基化预测模子相衔尾可进一步栽培预测效率。

癌症是民众示寂的主要原因之一，对癌症的“早发现、早会诊、早治愈”不错质问统统类型癌症的示寂率。现时，表不雅遗传学鸿沟的商榷正处于重生发展之中，其中DNA甲基化符号物的商榷尤为凸起，其商榷主张包括：⑴深入探讨DNA甲基化的调控机制，商榷不同甲基化情景下肿瘤的发生、发展以及对治愈的耐药性各异，为后续DNA甲基化符号物的开发提供愈加塌实的表面依据；⑵在本领层面，致力于于开发新式甲基化转动、甲基化检测本领和方法，以栽培检测的特异性和明锐性，何况为临床应用铺平谈路；⑶开发组合的生物符号物，将多种DNA甲基化符号物衔尾或与其他类型的生物符号物衔尾使用，最终构建更可靠的生物符号物模子；⑷运用机器学习和深度学习算法对DNA甲基化数据进行预测分析，构建复杂的算法和模子，从海量的甲基化数据中识别出具有会诊或预后道理的甲基化符号物。本大师共鸣全面梳理了DNA甲基化符号物的检测本领、临床应用过甚在肿瘤解决中的后劲，忽视了一系列具有前瞻性和推行指导道理的共鸣保举。将来，期待本共鸣进一步落地和推行，为患者的健康添砖加瓦，为医学鸿沟发展孝敬更多的理智和力量。